Réaction du biuret
Produits nécessaires:
- 3 grammes de Sulfate de cuivre pentahydraté (CuSO4,5H2O)
- 9 grammes de Sodium potassium tartrate ou "sel de Seignette" (KNaC4H4O6,4H20)
- 5 grammes de Iodure de Potassium (KI)
- 1 litre d'Hydroxyde de sodium 0.2 mol.l-1 (NaOH)
Mode opératoire :
Dissoudre le sulfate de cuivre et le tartrate double dans 500 ml de la solution de soude.
Ajouter l'iodure de potassium et complèter à 1000 ml avec la solution de soude.
Principe de la méthode du biuret:
En milieu alcalin (NaOH), à froid, les ions cuivriques (Cu
2+) forment avec les liaisons peptidiques un
complexe de coordination coloré en rose, qui ajouté à la teinte bleue du réactif donne finalement une
coloration pourpre (bleu-violet).
Cette réaction est positive dès que la molécule possède 3 à 4 liaisons peptidiques,
elle est donc utilisable pour les protéines et les polypeptides.
La mesure de l’absorbance se fait à 540 nm après avoir laissé la coloration se développer 30 min.
La technique tire son nom de la molécule le biuret NH
2–CO–NH–CO–NH
2 (obtenu par condensation de
2 molécules d’urée NH
2–CO–NH
2) qui donne une la coloration violette.
La technique a été développée par Gornall (1949) qui a laissé son nom au réactif utilisé pour la colorimétrie.
